Lyofilizací nebo lyofilizací je krátký laboratorní postup
Základy lyofilizace
Jedním z nejlepších způsobů uchovávání bakteriální, houbové, kvasinkové nebo jiné kultury mikroorganismů po dlouhou dobu je použití procesu lyofilizace. Tento krátký laboratorní postup lze provést s jakýmkoli běžně dostupným lyofilizátorem, který zachová vaši kulturní sbírku. Vzhledem k tomu, že lyofilizace je nejsložitější a nejdražší forma sušení, je proces obvykle omezen na jemné, tepelně citlivé materiály vysoké hodnoty. Látky, které nejsou mrazem poškozeny, mohou být obvykle lyofilizovány, takže skladování v chladničce není zbytečné.
Tento proces může trvat necelou tři hodiny a až 24 hodin, bez doby růstu kultury.
Postup krok za krokem lyofilizace
Za prvé, pěstujte přes noc kulturu nebo trávník mikroorganismu na LB nebo jiném vhodném nutričním agaru.
Dále připravte sterilní lahvičky se zkosenými víčky v autoklávu předem, s čepičkami (pryžovými zátkami) volně položenými nahoře. Umístěte papírové etikety vytištěné s identifikací kultury uvnitř trubek před autoklávováním. Případně použijte trubice s uzávěry určenými pro sterilitu .
Na destičku se přidá 4 ml lyofilizačního pufru. V případě potřeby mohou být buňky zavěšeny pomocí sterilní skleněné tyčinky.
Rychle přeneste kultivační suspenzi do sterilovaných lahviček. Přidejte přibližně 1,5 ml na jednu lahvičku. Utěsněte gumovou čepičkou.
Zmrazte kultivační suspenzi uvnitř lahviček umístěním lahviček do mrazničky s teplotou -20 ° C.
Jakmile jsou kultury zamrzlé, připravte lyofilizátor jeho zapnutím a nechte stabilizovat vhodnou teplotu a podmínky vakua. Postupujte podle pokynů výrobce pro konkrétní značku lyofilizéru, kterou používáte.
Opatrně a asepticky umístěte víčka lahví volně na vrchní části lahviček, aby se během procesu sušení vymrazováním mohla vyhnout vlhkosti a umístěte lahvičky do komory pro vymrazování. Aplikujte podtlak na komoru podle pokynů výrobce.
Doba kultivace se nechá zcela lyofilizovat (vyschnout). To může trvat od několika hodin až přes noc v závislosti na objemu každého vzorku a kolik vzorků máte.
Odstraňte vzorky z komory vymrazovače podle pokynů výrobce a okamžitě utěsněte injekční lahvičky s gumovými čepičkami a poté s lisovacími deskami.
Sběr lyofilizované kultury se uchovává při pokojové teplotě.
Produkty, které budete potřebovat
- Sušička za mrazu
- Živiny nebo jiné vhodné agarové destičky (a inkubátor pro růst kultury)
- Skleněná tyč
- Lyofilizační pufr
- Špičaté lahvičky s gumovými zátkami (a krycí destička pro nasazení víček)
- Mrazák
Odkaz:
SP Scientific. Základní principy lyofilizace. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/