Pufr citranu sodného se používá k izolaci RNA, protože minimalizuje bázickou hydrolýzu pramenů RNA. Toto činí důležitý krok při čištění mRNA během genomického výzkumu nebo při studiu transkripce.
Pufry na bázi citrátu mohou rovněž pomoci detekci antigenů v fixovaných tkáňových přípravcích, protože porušují vzniklé křížové vazby mezi antigeny a fixačními médii.
S níže uvedeným vodítkem vytvořte pufr s citrátem sodným o pH 6. Pokyny jsou nejen snadné, ale i rychlé. Měli byste trvat jen asi 10 minut, než dokončíte tyto kroky.
Dvě možnosti pro vytvoření vyrovnávací paměti
Existují dva způsoby, jak jít o vytvoření pufru citrátu sodného. Nejdříve zjistěte, zda máte kyselinu citrónovou i konjugovanou bázi, citrát sodný, s nímž pracujete. Pokud máte pouze kyselinu citronovou, není to problém. Stále můžete vytvářet vyrovnávací paměť.
Na druhou stranu, pokud máte kyselinu i základnu, vytvořte zásobní roztok každého z nich. Směs 21 g kyseliny citronové v 1 litru destilované vody a 29,4 g citrátu sodného v 1 litru destilované vody.
Pokud máte pouze kyselinu citronovou, promícháme 2,1 gramu v těsně pod 1 litru destilované vody a pokračujeme v dalším kroku.
Míchání roztoků kyseliny citronové a citrátu sodného
Nyní, když jste vytvořili svůj zásobní roztok (pokud jste měli jak kyselinu, tak základnu), nebo kyselinu míchal v destilované vodě (pokud jste ne), můžete se zaměřit na vaše řešení.
Smícháme 82 mililitrů roztoku kyseliny citronové s 18 mililitry roztoku citronanu sodného.
Poté celkový objem směsi dosáhne těsně pod 1 litr destilovanou vodou. Ponechte dostatečný objem, aby bylo možné přidávat hydroxid sodný (NaOH) v dalším kroku.
Nastavení pH
Za mírného míchání roztoku za použití magnetického míchadla použijte 1M hydroxid sodný pro nastavení hodnoty pH směsi na 6,0. Poté konečným objemem roztoku do deseti litrů destilovanou vodou použijte odměrnou baňku.
Co potřebujete k vytvoření vyrovnávací paměti
Nejen, že nebudete trvat velmi dlouho, než vytvoříte pufr citronanu sodného, ale ani pro něj nebudete potřebovat mnoho materiálů. S kyselinou citronovou, 1M hydroxidem sodným, destilovanou vodou a kalibrovanou pH sondou se dostanete do poloviny. Použití citrátu sodného je nepovinné.
Vytvoření vyrovnávacího zásobníku bude vyžadovat také 1litrový odměrný válec, 1litrovou odměrnou baňku a tři 1litrové lahve s médii. Nakonec budete potřebovat magnetickou míchací tyč a magnetické míchadlo.
Pokud nemáte všechny tyto materiály, zvažte použití laboratoře ve škole nebo na pracovišti, takže je nemusíte zakoupit sami. Tyto materiály můžete také snadno zakoupit online nebo navštívit prodejny specializovaných výrobků ve vaší oblasti.