Jak vyrobit tento imunohistochemický odbarvovací pufr
Fosfátový pufrovaný fyziologický roztok (PBS) je tlumivý roztok, který se běžně používá pro imunohistochemické (IHC) barvení a je často používán v biologickém výzkumu. PBS je roztok soli na bázi vody obsahující hydrogenfosforečnan sodný, chlorid sodný a v některých případech chlorid draselný a dihydrogenfosforečnan draselný.
Imunohistochemické barvení
Imunohistochemie se týká procesu detekce antigenů, jako jsou proteiny v buňkách tkáňového úseku, za použití principu protilátek, které se specificky váží na antigeny v biologických tkáních.
Imunofluorescenční barvení bylo první imunohistochemickou barvicí metodou.
Antigeny jsou viditelné, když jsou konjugovány s protilátkami používajícími fluorescenční barviva kvůli reakci vazby antigen-protilátka. Tento proces nastává, když je aktivován vzrušujícím světlem specifické vlnové délky pod fluorescenčním mikroskopem.
Osmolarita a iontové koncentrace řešení odpovídají těm lidskému tělu - jsou izotonické.
Recept na PBS
PBS můžete připravit několika způsoby. Existuje několik vzorců. Některé z nich neobsahují draslík, zatímco jiné obsahují vápník nebo hořčík .
Tento recept je relativně snadný. Je to pro 10X zásobní roztok PBS (0,1M). Můžete také udělat 1X zásobní roztok, nebo začít s tímto receptorem 10X a zředit na 1X.
Celý proces trvá asi 10 minut.
K dispozici je také možnost přidat Tween.
Co potřebujete k vytvoření vyrovnávací paměti PBS
- Jednosytný fosforečnan sodný (bezvodý)
- Hydrogenfosforečnan sodný (bezvodý)
- Chlorid sodný
- Měřítko a vážící lodě
- Magnetické míchadlo a míchací tyč
- Kalibrovaná pH sonda a vhodné roztoky pro úpravu pH
- 1L odměrná baňka
- Tween 20 (volitelné)
Jak si vyrobit fyziologický roztok pufrovaný fosfátem (PBS)
Naváží se 10,9 g bezvodého hydrogenfosforečnanu sodného (Na2HP04), 3,2 g bezvodého monohydrátu fosforečnanu sodného (NaH2P04) a 90 g chloridu sodného (NaCl).
Rozpusťte v těsně pod 1 litru destilované vody.
Hodnota pH se upraví na 7,4 a roztok se upraví na konečný objem 1 litr.
Před použitím zředit 10 x a v případě potřeby znovu upravit hodnotu pH.
Můžete připravit roztok PBS obsahující 0,5% Tween 20 přidáním 5 ml Tweenu 20 do 1L roztoku.
Tipy pro vytvoření vyrovnávací paměti PBS
Pufr uchovávejte při pokojové teplotě po provedení roztoku PBS.
Bezvodé reagencie mohou být nahrazeny, ale budete muset přepočítat odpovídající množství každé z nich, aby se přizpůsobily přidané molekuly vody.
Použití fosfátového pufrovaného fyziologického roztoku (PBS)
Fosfátový pufrovaný fyziologický roztok má mnoho použití, protože je pro většinu buněk izotonický a netoxický. Lze jej použít ke zředění látek a často se používá k opláchnutí nádob z buněk. PBS se může použít jako ředidlo v různých metodách k sušení biomolekul, protože molekuly vody v něm budou strukturovány například kolem substance-protein. Bude "vysušen" a imobilizován na pevný povrch.
Hodnota pH zůstává stabilní a konzistentní, aby se zabránilo zničení buněk.
Tenký film vody, který se váže na látku, zabraňuje denaturaci nebo jiným změnám konformace. Uhlíkové pufry mohou být použity pro stejný účel, ale s menší účinností.
PBS může být také použit pro získání referenčního spektra při měření adsorpce proteinu v elipsometrii.