Tento buffer se používá ke studiu pohybu DNA
Tento pufr má nízkou iontovou sílu a nízkou pufrovací kapacitu. Je nejvhodnější pro elektroforézu velkých (> 20 kb) kusů DNA a bude třeba je často vyměňovat nebo recirkulovat na delší (> 4 h) dobu běhu gelu.
S ohledem na tuto skutečnost můžete chtít zvážit několik šarží vyrovnávací paměti.
Vzhledem k tomu, že je vyrovnávací paměť snadná a kroky lze provádět rychle, vytváření více než jedné dávky najednou by nemělo být časově náročné nebo obtížné. Při použití níže uvedených pokynů by mělo trvat vyrovnávací paměť TAE pouhých 30 minut. Zde je návod:
Připravte zásobní roztok EDTA
Předem se připraví roztok EDTA (ethylendiamintetraoctové kyseliny). EDTA nebude úplně do roztoku, dokud se hodnota pH nezmění na hodnotu 8,0. Pro 500 ml zásobní roztok 0,5 M EDTA zvážíme 93,05 g disodné soli EDTA (FW = 372,2). Rozpusťte v 400 ml deionizované vody a upravte pH hydroxidem sodným (NaOH). Roztok doplňte na konečný objem 500 mililitrů.
Bitevní zásobní roztok TAE
Vytvořte koncentrovaný (50x) zásobní roztok TAE vážením 242 gramů baze Tris (FW = 121,14) a rozpusťte jej v přibližně 750 mililitrech deionizované vody.
Pečlivě přidejte 57,1 mililitrů ledové kyseliny a 100 mililitrů 0,5 mililitru EDTA (pH 8,0). Potom upravte roztok na konečný objem 1 litr. Tento zásobní roztok lze skladovat při pokojové teplotě. Hodnota pH tohoto pufru není nastavena a měla by být asi 8,5.
Připravte pracovní řešení TAE
Pracovní roztok 1x TAE pufru je vyroben jednoduše zředěním zásobního roztoku 50x v deionizované vodě.
Konečné koncentrace solutu jsou 40 mM. Tris-acetát a 1 mM EDTA. Pufr je nyní připraven k použití při běhu agarózového gelu.
Co potřebujete pro vyrovnávací paměť
Protože vytváření vyrovnávací paměti TAE vyžaduje pouze rychlou a jednoduchou sadu instrukcí, počet potřebných materiálů není příliš velký. Budete potřebovat pouze disodnou sůl EDTA, bázi Tris a ledovou kyselinu octovou.
Vytvoření vyrovnávací paměti rovněž vyžaduje měření pH a kalibrační standardy. Budete také potřebovat kádinky nebo lahve o objemu 600 mililitrů a 1500 mililitrů, stejně jako odměrné lahve. Konečně budete potřebovat deionizovanou vodu, míchací tyčinky a míchat talíře.
Obalování nahoru
Kde plánujete vytvořit vyrovnávací paměť - na školním pracovišti, na pracovišti nebo na jiném místě, jako je váš domov? Před zahájením kontroly ujistěte se, že máte všechny výše uvedené materiály pro buffer TAE.
Pokud byste raději nemuseli platit za materiály, doporučuje se vytvořit buffer mimo váš domov. Můžete snadno objednat materiály, které potřebujete online nebo navštívit specializovaný obchod pro ně.