Také označovaná jako analýza RFLP, technika využívá polymorfizmů v genetických kódů jednotlivých lidí. Přestože všichni členové druhu mají v podstatě stejný genetický make-up, tyto nepatrné rozdíly představují variace fenotypu, jako je vzhled nebo metabolismus, mezi jednotlivci.
RFLP: Analýza techniky a aplikace
Technika RFLP analýzy zahrnuje řezání určité oblasti DNA se známou proměnlivostí, s restrikčními enzymy, poté separací fragmentů DNA elektroforézou na agarosovém gelu a stanovením počtu fragmentů a relativních velikostí.
Restrikční enzym je enzym, proteinová molekula, která štěpí DNA na restrikčních místech. V podstatě se vzorek DNA rozpadá a štěpí restrikčními enzymy. Výsledné fragmenty jsou odděleny podle jejich délky a vzorek velikostí fragmentů se bude lišit u každého testovaného jedince.
Celý proces RFLP vyžaduje značení sondy, fragmentaci DNA, elektroforézu, blotování, hybridizaci, mytí a autoradiografii. Zjištěný RFLP se vizualizuje za použití rentgenového filmu v autorádiografii, kde mohou být fragmenty DNA pozorovány a analyzovány poté, co jsou od sebe odděleny elektroforézou.
Některé z aplikací pro analýzu RFLP zahrnují:
- DNA otisky prstů . Forenzní vědci mohou použít analýzu RFLP k identifikaci podezřelých na základě důkazních vzorků shromážděných na scénách zločinů.
- Otcovství. RFLP se také používá při stanovení otcovství nebo za účelem zjištění původu.
- Genetická rozmanitost. Tato technika může být využita ke studiu evoluce a migrace volně žijících živočichů, studium chovatelských vzorků v populacích zvířat a detekce a diagnostiky některých onemocnění.
Technika použití RFLP detekce variace genomů je důležitým nástrojem při mapování genomu a analýze genetických nemocí. Pokud se místo určitého chorobného genu hledá v určitém chromozomu, pak by vědci analyzovali DNA členů rodiny s tímto onemocněním a poté hledali podobné vzory dědičnosti v alelách RFLP.
Jakmile je lokalizován gen onemocnění, analýza RFLP u jiných členů rodiny může odhalit nosič mutovaných genů nebo signalizovat celkové riziko onemocnění. Je důležité poznamenat, že technika RFLP není široce používána, protože novější, robustnější techniky se používají pro analýzu DNA ve forenzní vědě a v několika dalších oblastech.
Negativní aspekt analýzy
Bohužel metoda RFLP analýzy je únavná a pomalá. Kromě požadavku na velké množství vzorkové DNA - vzorek by obvykle musel mít asi čtvrtinu, což je poměrně velké pro vzorky DNA - proces, od značení sond až po mytí a autorádiografie, může trvat až celý měsíc dokončete.
Výsledky z Projektu lidského genomu téměř nahradily potřebu RFLP. Projekt umožnil určení celé sekvence DNA nalezené v lidských buňkách, lidském genomu a pro identifikaci všech genů v lidském genomu.